Kỹ thuật Realtime PCR – Những bí quyết thành công

Rate this post

Kỹ thuật Realtime PCR, hay PCR thời gian thực, là một công nghệ tiên tiến trong lĩnh vực phòng thí nghiệm. Với kỹ thuật này, bạn có thể nhân bản hàng tỷ bản sao của DNA mục tiêu trong ống nghiệm chỉ trong thời gian ngắn. Trong bài viết này, chúng ta sẽ cùng tìm hiểu về các khái niệm cơ bản và những bí quyết để thực hiện Realtime PCR thành công.

Realtime PCR là gì?

PCR (phản ứng khuếch đại DNA) là một phương pháp được sử dụng để nhân bản và khuếch đại DNA. Trong kỹ thuật PCR truyền thống, sau khi mục tiêu DNA được nhân bản, các bước phân tích tiếp theo sẽ được thực hiện để xác định kết quả. Tuy nhiên, với kỹ thuật Realtime PCR, kết quả khuếch đại DNA được hiển thị ngay sau mỗi chu kỳ. Điều này giúp tiết kiệm thời gian và công sức của người làm thí nghiệm, không cần phải tiếp tục các bước phân tích sau khi khuếch đại DNA.

Biểu đồ khuếch đại trong Realtime PCR

Trước khi tiến hành Realtime PCR, bạn cần hiểu một số khái niệm cơ bản như đường nền, ngưỡng, chu kỳ ngưỡng, đường chuẩn và hệ số tương quan.

  • Đường nền (baseline): là số chu kỳ của phản ứng PCR mà tín hiệu huỳnh quang đặc hiệu tăng dần nhưng chưa đạt ngưỡng của thiết bị. Đường nền được xác định trong khoảng từ chu kỳ 3 đến chu kỳ 15 và có thể điều chỉnh theo nhu cầu.

  • Ngưỡng (threshold): là giá trị huỳnh quang được xác định tùy ý dựa trên đường nền.

  • Chu kỳ ngưỡng (cycle threshold – Ct): là số chu kỳ PCR mà trong đó tín hiệu huỳnh quang đặc hiệu vượt qua ngưỡng. Nói cách khác, Ct là số chu kỳ của phản ứng Realtime PCR mà tín hiệu đặc hiệu vượt qua tín hiệu nền.

  • Đường chuẩn: là đường biểu diễn mối quan hệ giữa chu kỳ ngưỡng với số lượng DNA mục tiêu ban đầu trong mẫu chuẩn.

  • Hệ số tương quan: đánh giá độ chính xác của việc hút dung dịch mẫu chuẩn. Giá trị R2 ≥ 0.90 đảm bảo đường chuẩn đạt độ tuyến tính cao.

Bí quyết thành công cho Realtime PCR

Để đạt được kết quả chính xác và đáng tin cậy trong Realtime PCR, bạn cần lưu ý một số điểm sau đây:

  1. Chọn thiết bị phòng thí nghiệm chất lượng tốt như máy Realtime PCR để đảm bảo tính chính xác và đáng tin cậy cho kết quả.

  2. Chuẩn bị mẫu và tái liệu cẩn thận, đảm bảo chúng không bị nhiễm tạp chất hoặc biến đổi trước khi tiến hành PCR.

  3. Đặt chu trình PCR phù hợp với mẫu và các thông số kỹ thuật tương ứng.

  4. Kiểm tra và hiệu chuẩn thiết bị trước khi thực hiện để đảm bảo độ chính xác và đáng tin cậy của kết quả.

  5. Xây dựng đường chuẩn đúng cách và sử dụng để đánh giá kết quả của mẫu thử.

Với những bí quyết trên, bạn sẽ có cơ hội tiến xa trong kỹ thuật Realtime PCR. Đừng quên ghé thăm Trang chủ – Cungnuoi.com để cập nhật những thông tin mới nhất về phòng thí nghiệm và chăm sóc thú cưng nhé!